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            荧光显微镜激发荧光的方式有哪些

            点击次数:1253  发布时间:2021-06-28
              荧光显微镜是医院科研、病理、检验等部门常用的医用光学仪器之一。因为普通的显微镜是在明亮的背景上观察暗物,而荧光显微镜是在暗背景下观察彩色的图像,因此它比普通的显微镜分辨力提高100倍,可以观察到普通显微镜看不到的细节。但是它的调整,校正难度较高,只要解决了荧光显微镜的问题,其它显微镜问题就迎刃而解。
              光源是荧光显微镜主要组成部分,荧光显微镜都采用200W的超高压汞灯作光源。它是由石英玻璃制作,中间呈球形,内充有一定量的汞,工作时在两极间放电,引起水银蒸发,球内气压迅速升高,当水银完全蒸发时,可达50~70个标准大气压力,这一过程一般约5~15min。超高压汞灯的发光是电极间放电使水银分子在不断解离和还原过程中发射光量子的结果。它发射很强的紫光,足以激发各类荧光物质,因此被荧光显微镜普遍采用。
              荧光显微镜是免疫荧光组织化学的基本工具。它是由超高压光源、滤片系统(包括激发和压制滤板)、光学系统和摄影系统等主要部件组成,是利用一定波长的光激发标本发射荧光。
              荧光显微镜激发荧光的方式:按光的波长范围分为UV激发法(使用紫外线照明法)和BV激发法(使用蓝紫光)两种。
              UV激发法是用短于400nm外光进行激发。该法不存在可见的激发光,所以被观察的荧光呈现该染料固有的荧光,容易判别标本上的特异荧光和背景组织的自身荧光。
              BV激发法是以404nm、434nm为中心的由紫外至蓝光进行激发。该方法使用蓝光照射标本,所以荧光显微镜的截止滤光片必须使用可完全阻断蓝光并可充分通过所需绿、黄荧光的滤光片。用于荧光抗体法的荧光色素。对于激发光的极大吸收波长和荧光的极大发光波长比较接近,所以BV激发法使用的滤光片必须使用锐截止式滤光片。该法可用蓝光作为激发光,所以荧光色素的吸收效率较高,可得到较明亮的图像。其缺点是500nm以下的荧光无法看到,而500nm以上的使整个图像显黄色。在荧光抗体法中,大多以荧光色素特有的颜色来判断其特异性,所以在讨论微妙的特异性时,上述BV激发法的缺点往往影响极大。 
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